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知識問答:ELISA中常見的假陰性的因素

更新時間:2024-08-20    點擊次數(shù):3064

  ELISA中常見的假陰性的因素

在ELISA實驗中,假陰性的常見原因主要包括內(nèi)源性因素、外源性因素、操作因素和試劑盒自身因素。為了減少假陰性的發(fā)生,需要從多個方面進行預(yù)防和解決。

內(nèi)源性因素

基因突變:個別個體的基因突變可能導致檢測結(jié)果為假陰性,尤其是當檢測用抗體的結(jié)合位點在突變區(qū)時。

待檢物含量偏低:樣本內(nèi)被測物的濃度較低,易造成假陰性結(jié)果,如某些疾病發(fā)展初期被檢物濃度低于檢測限。

外源性因素

樣品反復(fù)凍融:血清樣品的反復(fù)凍融會使血清中的抗體效價下降,造成假陰性出現(xiàn)。

樣品處理不當:標本用肝素或EDTA等抗凝劑處理,高濃度肝素具有強大的負電荷,能吸附酶標記物不易洗脫,導致假陰性結(jié)果。

樣品存放不當:標本放置時間過長,抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。

操作因素

加樣不準確:樣品稀釋液多加或血清少加,會降低血清中待檢IgG的吸附性,導致假陰性結(jié)果。

洗滌不當:洗滌條件一致性較差或洗滌機使用不當,血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易造成“花板”,導致假陽性或假陰性。

孵育問題:溫箱調(diào)溫器異常使溫箱溫度降低或孵育時反復(fù)打開溫箱門,造成孵育時反應(yīng)不充分,出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

試劑盒自身因素

試劑盒敏感性:某些廠家為了提高檢測的特異性,會降低試劑盒的敏感性,從而造成在檢測過程中假陰性的出現(xiàn)。

為了減少ELISA實驗中的假陰性,需要從標本采集、處理、保存到實驗操作和試劑盒選擇等多個環(huán)節(jié)進行嚴格控制和管理。這包括優(yōu)化標本處理流程、提高操作一致性、選擇高質(zhì)量的試劑盒等措施。通過這些措施,可以有效降低ELISA實驗中假陰性的發(fā)生率,提高實驗結(jié)果的準確性和可靠性。x

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