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本生闡述:ELISA試劑盒使用說明書

更新時間:2023-06-19    點擊次數:1829

  本生闡述:ELISA試劑盒使用說明書

  ELISA試劑盒質量保證是一個復雜的過程,許多重要的環節都影響到檢測的質量:

  一、操作因素對ELISA結果的影響ELISA操作步驟復雜,操作不當將引起較大的誤差。以下敘述各個步驟中的影響因素。

  1.加樣

  2.溫育

  3.洗滌

  4.顯色

  5.比色

  二、灰區的設置通常情況下,ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報告結果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結果報告的依據。

  三、標本復查ELISA手工檢測過程復雜,影響因素較多,即使室內質控在控,也可能因孔間差異而造成結果的差異,因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查。


試劑盒1.jpg


  四、結果判斷和報告常用下列幾種方法表示結果:

  1.定性測定

  2.半定量測定 結果一般以滴度表示。

  3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標準曲線,結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。

  4.結果報告

  五、操作步驟:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。5. 終止反應

  6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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